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DSP是不溶于水的同型双功能的N-羟基琥珀酰亚胺酯（NHS-酯）。DTSSP是其水溶性类似物。这些交联剂是硫醇可裂解的，与伯胺反应的并且已经用于很多应用中。NHS-酯能够与伯氨基（-NH2）有效反应形成稳定的酰胺键，释放N-羟基琥珀酰亚胺。DSP是非磺化的，因此是疏水性的，而DTSSP是磺化的和水溶性的。需要将DSP先溶解在有机溶剂中再加入到水相反应混合物中。因为DSP没有具有带电荷的基团，所有是亲脂性和可渗透膜的，能够用于细胞内和膜内蛋白质的共轭反应。DTSSP则可以直接添加到水相中，用于交联细胞表面蛋白质。


分子量：404.42
间隔臂：12Å
化学式：C₁₄H₁₆O₈N₂S₂
保存：-20℃


一、在溶液中交联蛋白的方法

• 所需材料
  
  • 交联剂溶液：将DSP溶于无水DMSO中，10～25mM。DTSSP可溶于水，缓冲液或直接加入样品。或在pH5.0，5mM柠檬酸钠缓冲液中制备DTSSP，并逐滴加入到反应混合物中。丢弃任何未使用的重构交联剂。
    
  • 反应缓冲液：磷酸盐缓冲液，HEPES，pH7～9的碳酸氢盐/碳酸盐或硼酸盐缓冲液。避免含有伯胺的缓冲液，因为胺将与交联反应竞争。
• 步骤：
  
  • 用反应缓冲液配制蛋白质溶液。如果样品溶液含有Tris或甘氨酸，则需在反应缓冲液进行深度透析。
    
  • 向蛋白质样品中加入所需的交联剂。如果蛋白质浓度大于5mg/ml，则使用10倍摩尔过量的交联剂。若样品小于5mg/ml，使用20～50倍摩尔过量的交联剂。建议使用的交联剂终浓度为0.25～5mM。
    
  • 将反应混合物在室温下孵育30分钟或在冰上孵育2小时。
    
  • 加入20～50mM的胺溶液（如Tris或甘氨酸）淬灭反应，孵育15分钟。

二、细胞内和细胞外交联的方法
DTSSP用于细胞表面蛋白交联，因为它是不渗透膜的。DSP渗透膜，用于细胞内蛋白交联。

• 所需材料
  
  • 交联剂溶液：反应前将DSP溶于无水DMSO中。DTSSP可溶于水，缓冲液或直接加入样品。或在pH5.0，5mM柠檬酸钠缓冲液中制备DTSSP，并逐滴加入到反应混合物中。丢弃任何未使用的重构交联剂。
    
  • 反应缓冲液：磷酸盐缓冲液，HEPES，pH7～9的碳酸氢盐/碳酸盐或硼酸盐缓冲液。避免含有伯胺的缓冲液，因为胺将与交联反应竞争。
    
  • 淬灭溶液：1M Tris，pH7.5（Tris或甘氨酸可用于淬灭反应）。
• 步骤：
  
  • 用反应缓冲液洗涤细胞两次以除去含胺的培养基。
    
  • 对于细胞表面相互作用研究，向细胞中加入配体并在4℃下孵育1小时。
    
  • 加入交联剂溶液至最终浓度为1～2mM。
    
  • 将反应混合物在室温下孵育30分钟或在冰上孵育2小时。
    
  • 加入10～20mM淬灭缓冲液淬灭反应，孵育15分钟。

• DSP和DTSSP对湿度敏感，在4～8℃干燥保存。为了避免产品中的水分冷凝，开瓶前必须先平衡至室温。（平衡可能需要30分钟）。
  
• NHS-酯部分易水解并无活性，因此不要制备用于储存的储备溶液，实验前配制，弃掉所有重构交联剂。
  
• NHS酯的水解是酰化反应的主要竞争反应。水解速度会随着pH的增加而加快，并且在稀释的蛋白质或肽溶液中更容易发生。
  
• 显示生物活性的蛋白质（即酶，抗体等）可能在交联时失去活性，这可能是交联时蛋白质分子的构象变化引起的。当交联剂修饰参与结合底物和抗原的赖氨酸基团时，也可能使活性丧失。
  
• 切割DSP和DTSSP，可以在37℃下用10～50mM DTT孵育30分钟或在100℃下，在SDS-PAGE上样缓冲液（2%SDS，6.25mM Tris，10%甘油）中加入5% β-巯基乙醇，孵育5分钟。

相关搜索：DSP交联剂(不溶于水)，DSP crosslinker，3,3'-二硫代二丙酸双(N-羟基琥珀酰亚胺酯)，Dithiobis(succinimidylpropionate)